SINGLE DOSE TOPICAL CORTICOSTEROID INHIBITS IL5 AND IL13 IN NASAL LAVAGE FOLLOWING GRASS POLLEN CHALLENGE

E.M Erin et al. Allergy 2005; 60:1524-1529

Objetivo:
Evaluar eosinófilos, quimiocinas y citocinas en el lavado nasal en una serie de puntos luego del reto nasal con alergeno. Pacientes con rinitis alérgica estacional fuera de la estación del polen de malezas. Estudian el efecto de una dosis simple de esteroide tópico aplicado.
Métodos:
32 pacientes con 2 años de rinitis alérgica por phleum pratense, no fumadores, de 19 a 53 años. Se excluyen aquellos con antecedente de recibir esteroide tópico o medicamentos antialérgicos en los 6 meses previos o inmunoterapia en previos 5 años y aquellos con evidencia de rinitis activa al examen físico. Se aleatorizaron pacientes a recibir budesonida 100 microlts en cada fosa nasal o placebo, doble ciego, en dos días con 1 semana de diferencia. Se les aplicaba el placebo o budesonida y a los 30 minutos el alergeno de phleum pratense 500 unidades biológicas en cada fosa nasal. Se hacía lavado nasal a las 0, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas post reto nasal. El lavado nasal se hizo con PBS ( phosphate buffered saline) 6 ml precalentado a 37 grados, se dejaba 30 segundos y luego se reintroducía y sacaba por 30 veces en 2 minutos. Los síntomas nasales se anotaban antes, a 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas. Eran congestión nasal, rinorrea, estornudos y prurito con clasificación de 0 a 3. 0= no, 1= leve, 2=moderado, 3= severo. El liquido obtenido se centrifugaba a 4 grados por 10 minutos a 400 g y se recolectaba el sobrenadante. El pellet celular se resuspendía en 0.01% dithiothreitol en PBS, se colocaba en un mixer por 10 minutos y luego se centrifugaba, el sobrenadante se descartaba y el pellet nuevo de células se resuspendía en PBS. Se hacía estimativo de células con hemocitometro de Neubauer. La suspensión de células se diluía y se producían cytospin slides que se teñían con colorante de Diff-Quik y el diferencial celular se hacía en 400 leucocitos.
El sobrenadante del lavado nasal se centrifugaba a través de filtros de acetato de celulosa 0.22 micras a 4 grados por 30 minutos a 13.000 g. Se analizaron eotaxina, RANTES, IL5, IL8, IL13, MCP-1 con el luminex 100 IS. Las sensibilidades para IL5, IL8, IL10, IL13, MCP-1 y eotaxina fueron 1.5 pg/ml y para RANTES 2.3 pg/ml.. El analisis de proteína se hizo con Bradford protein assay 200 microlt mezclado con 10 microlt de la muestra o del Standard(BSA en PBS de 2 a 0.03mg/ml).Los platos se leyeron luego de 5 minutos a 620nm.
Resultados:
Los síntomas fueron casi inmediatos post provocación y duraron hasta 2 horas antes de decaer. p (<0.01 a 1 y 2 horas). Los eosinófilos aumentaron a 1-6 horas pero permanecieron elevados hasta 24 horas. Los niveles de IL5, 13, RANTES, MCP-1 aumentaron significativamente luego de la provocación. IL8 aumentó pero no significativamente. Con la budesonida luego de la provocación hay disminución significativa de los síntomas a las 8 y 24 horas (p<0.05) y de los eosinófilos a las 4 -8 horas (p<0.05). La IL13 disminuyó significativamente a las 2, 4, 6, 8 y 24 horas (p<0.05), la IL5 disminuyó significativamente a las 6, 8, y 24 horas (p<0.05). No hubo inhibición significativa en niveles totales de proteína, eotaxina, MCP-1, RANTES o IL8.
Discusión:
El principal hallazgo del estudio es la ablación de las respuestas de IL5 e IL13 que siguen a la provocación con el alergeno en respuesta a una dosis de esteroides. Hay inhibición de la secreción mucosa de IL5 y 13 inducida por alergeno dentro de las 2 horas siguientes a la aplicación de budesonida nasal y dentro de las 6 horas hay inhibición del flujo de eosinófilos y dentro de las 8 horas hay inhibición de los síntomas.
La disminución de las citocinas puede teóricamente ser por vasoconstricción local que da una disminución de la permeabilidad vascular pero esto no es el caso porque las otras proteínas no se disminuyen. La ablación de la respuesta de IL5 e IL13 ante la budesonida se puede explicar por acción en el factor de transcripción GATA-3 que tiene un papel crítico en la diferenciación TH2 y en la inflamación de la vía aérea. GATA-3  puede ser el principal factor remodelante de cromatina alrededor del locus IL4/ IL5/ IL13 en las células estimuladas con antígeno e IL4. El pretratamiento con budesonida no tiene efectos en los síntomas nasales inmediatos pero disminuye estadísticamente los síntomas a las 8 y 24 horas.